五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦能量代謝的影響
馬素好 李鳳麗 張家梁 ( 鄭州澍青醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 鄭州 450064)
〔摘 要〕 目的 探討五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦能量代謝的影響。方法 將小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、尼莫地平組、五味子水堤物大、中、小劑量組，后四組分別灌服尼莫地平混懸液、五味子水提物大、中、小劑量?？瞻捉M和模型組給予同體積生理鹽水，每日 1 次，連續(xù)給藥 10 d，采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉，建立反復(fù)腦缺血再灌注模型。術(shù)后24 h 用避暗法進(jìn)行行為學(xué)檢測，觀察并記錄小鼠*進(jìn)入暗室的潛伏期及 5 min 內(nèi)進(jìn)入暗室遭電擊的次數(shù)。行為學(xué)檢測完畢小鼠斷頭取腦，測乳酸( LD) 、乳酸脫氫酶( LDH) 、乙酰膽堿酯酶( AchE) 活力以及 ATP 酶活力。結(jié)果 與模型組相比，尼莫地平組可以顯著增加小鼠的潛伏期、顯著降低小鼠錯(cuò)誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大劑量組可以明顯增加小鼠潛伏期并顯著降低小鼠錯(cuò)誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物中、小劑量組均可顯著減少小鼠 LD 的含量( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大、中劑量組均可以顯著升高小鼠 LDH 的活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物組小劑量均可顯著升高小鼠 AchE 活力( P ＜ 0. 01) ; 與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物大劑量組可以顯著升高小鼠 Na + -K + -ATP 酶活力( P ＜
0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大、中劑量組均能顯著升高小鼠 Ca2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) ，尼莫地平組、五味子水提物大劑量組能夠顯著升高小鼠 Ca2 + -Mg2 + -ATP 酶活力( P ＜ 0. 01) 。結(jié)論 五味子水提物可以改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力并提高腦組織功能。
〔關(guān)鍵詞〕 五味子水提物; 反復(fù)腦缺血再灌注; 學(xué)習(xí)記憶; 腦能量代謝
〔中圖分類號〕 Ｒ285 〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕 A 〔文章編號〕 1005-9202( 2016) 21-5243-02; doi: 10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 21. 012
對于腦血管疾病的治療，目前西醫(yī)僅以改善腦部血循環(huán)、 擴(kuò)血管增加缺血區(qū)血流量、消除腦水腫、降低血液黏滯性、防止血栓延續(xù)等對癥治療為主〔1〕，但大多西藥都伴隨著嚴(yán)重不良反應(yīng)，制約了藥物療效的發(fā)揮和疾病的康復(fù)。中藥在對抗腦缺血發(fā)作方面有著自己的優(yōu)勢。五味子性酸、甘、溫，具有收斂、固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效。前期人們重在對五味子的藥理藥性方面的研究。近年來，有人對五味子藥理活性也進(jìn)行了研究〔2〕，本實(shí)驗(yàn)研究五味子水提物對反復(fù)腦缺血再灌注致記憶障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶以及能量代謝的影響。
1 材料與方法
1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，體重 19 ～ 22 g，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證號: 1011023。
1. 2 試劑 五味子為木蘭科植物五味子( Turcz) 的干燥成熟果實(shí)，又稱北五味子〔3〕，該藥購自河南皖西制藥有限公司，并經(jīng)專家鑒定為正品。五味子 100 g，經(jīng)水煎煮兩次，合并兩次濾液，濃縮至 200 ml( 1 ml 含生藥 0. 5 g) 。尼莫地平片，生產(chǎn)廠家: 天津市中央藥業(yè)有限公司，規(guī)格 30 mg / 片，批號 0903108。小鼠條件反射箱，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司。乙酰膽堿酯酶( AChE) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有 限公司，批 號20111012; 乳酸脫氫酶( LDH) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20110911; 乳酸( LD) 測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20111009; ATP 酶測試盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，批號 20111101。
1. 3 實(shí)驗(yàn)方法 將 72 只昆明種小鼠隨機(jī)分成 6 組( 雌雄分籠飼養(yǎng)) ，分別為: 空白組、模型組、尼莫地平組、五味子水提物大、中、小劑量組。除空白組和模型組外，給尼莫地平組小鼠灌服
基金項(xiàng)目: 鄭州市科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助項(xiàng)目( No. 21PCXTD520)
第yi作者: 馬素好( 1969-) ，女，在職碩士，主治醫(yī)師，主要從事心腦血管內(nèi)科研究。
尼莫地平混懸液( 0. 01 g / kg、0. 2 ml /10 g) ，給五味子各組分別灌服五味 子 水 提 物 大、中、小 劑 量 ( 0. 6 g / kg、0. 3 g / kg、
0. 15 g / kg、0. 2 ml /10 g) ?？瞻捉M和模型組給予同體積生理鹽水，每日 1 次，連續(xù)給藥 10 d，進(jìn)行手術(shù)。用 10% 的水合氯醛進(jìn)行麻醉，將上述小鼠仰位固定在鼠板上，行頸部切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線備用。然后用動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷血流，10 min之后，松開動(dòng)脈夾，使血液再灌注 10 min，反復(fù)進(jìn)行 2次。手術(shù)之后的創(chuàng)口應(yīng)以碘伏消毒，后縫合傷口。術(shù)后24 h，上述各組小鼠均進(jìn)行行為學(xué)測定( 避暗法)〔4〕，將小鼠頭部背向洞口放入明室，然后通以 25 V 的電壓，同時(shí)啟動(dòng)計(jì)時(shí)器，小鼠一進(jìn)入立即受到電擊，而計(jì)時(shí)器則同時(shí)停止計(jì)時(shí)。取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時(shí)間，此即潛伏期。24 h 后重新測驗(yàn)，記錄潛伏期和 5 min 內(nèi)的電擊次數(shù)。將完成行為學(xué)測定的小鼠斷頭取腦，其中一半稱重， 加 9 倍的生理鹽水制成 10% 的腦勻漿，以備測 LD、LDH、AchE 活力以及 ATP 酶活力，上述測定方法均按各自的試劑盒說明書進(jìn)行。
1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS19. 0 軟件進(jìn)行單因素方差分析。
2 結(jié) 果
2. 1 五味子水提物對小鼠行為學(xué)的影響( 避暗法) 與空白組相比，模型組可顯著降低小鼠的潛伏期、顯著升高小鼠的錯(cuò)誤 反應(yīng)次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，說明該實(shí)驗(yàn)造模成功。與模型組相比，尼莫地平組可以顯著增加小鼠的潛伏期、顯著降低小鼠錯(cuò) 誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( 均 P ＜ 0. 01) ，五味子水提物大劑量組可以明顯增加小鼠潛伏期，顯著降低小鼠錯(cuò)誤反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)( P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。見表 1。
2. 2 五味子水提物對小鼠腦組織中 LD、LDH 及 AChE 活力的影響 與空白組相比，模型組能夠顯著提高小鼠 LD 的含量、顯著減少小鼠 LDH 及 AchE 的活力( P ＜ 0. 01) ，說明本實(shí)驗(yàn)造模成功。與模型組相比，尼莫地平組、五味子水提物中、小劑量組
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